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多肽合成相關(guān)
蛋白表達(dá)相關(guān)
抗體制備相關(guān)

1、提供哪些多肽定制服務(wù)？

三羊開(kāi)肽可提供優(yōu)質(zhì)的多肽合成、快速多肽合成、多肽文庫(kù)構(gòu)建和大規(guī)模多肽合成服務(wù)。

2、多肽合成使用的是什么辦法？

三羊開(kāi)肽引進(jìn)的是國(guó)外先進(jìn)的固相合成技術(shù)，可以根據(jù)客戶需求進(jìn)行個(gè)性化的多肽定制。

3、最長(zhǎng)可以合成多少長(zhǎng)度的多肽？

三羊開(kāi)肽可以合成長(zhǎng)達(dá)189個(gè)氨基酸序列的多肽，可提供毫克級(jí)到千克級(jí)，純度可達(dá)99%。

4、合成一條多肽，常規(guī)需要多久時(shí)間？

根據(jù)多肽序列長(zhǎng)度和難易程度的不同，合成時(shí)間有所不同。常規(guī)多肽合成時(shí)間大約為2周。三羊開(kāi)肽還可以提供快速多肽合成服務(wù)，最快可3天交付。

5、多肽采用何種形式發(fā)貨？

三羊開(kāi)肽的多肽以凍干粉形式發(fā)貨，一般為灰白色，組成不同，多肽粉末的顏色有差異，儲(chǔ)存在2ml離心管內(nèi)，同時(shí)可按客戶需求進(jìn)行分裝。

6、產(chǎn)品交付時(shí)提供哪些數(shù)據(jù)報(bào)告？

每條多肽均提供MS和HPLC報(bào)告。同時(shí)，我們還可以根據(jù)客戶需求提供溶解度報(bào)告及內(nèi)毒素測(cè)試報(bào)告。

7、多肽如何儲(chǔ)存？

多肽想長(zhǎng)期保存得話需要避光，并應(yīng)保存在-20度環(huán)境內(nèi)，盡可能地保持多肽穩(wěn)定性；短期保存可以保存在4度環(huán)境內(nèi)。短期運(yùn)輸中外界溫度對(duì)多肽的有效期和質(zhì)量不會(huì)有影響。

8、多肽合成中如果遇到問(wèn)題該如何處理？

每條多肽都具有特殊的性質(zhì)，在合成過(guò)程中有時(shí)不能達(dá)到預(yù)期的結(jié)果。如果由于一些特殊原因，三羊開(kāi)肽不能成功交付多肽樣品，技術(shù)人員將會(huì)及時(shí)與您溝通聯(lián)系。

1、三羊開(kāi)肽生物擁有哪些蛋白表達(dá)系統(tǒng)？

三羊開(kāi)肽生物科技有限公司擁有完整的蛋白表達(dá)技術(shù)平臺(tái)：包括原核蛋白表達(dá)與純化、酵母蛋白表達(dá)與純化、昆蟲細(xì)胞蛋白表達(dá)與純化、哺乳動(dòng)物細(xì)胞蛋白表達(dá)與純化。

2、如何選擇合適的蛋白表達(dá)系統(tǒng)？

根據(jù)客戶蛋白來(lái)源（細(xì)菌、動(dòng)物或其它）和純化蛋白用途的不同，選擇不同的蛋白表達(dá)系統(tǒng)。如果不知道該如何選擇，可以咨詢客戶進(jìn)行推薦。

3、蛋白服務(wù)和長(zhǎng)鏈多肽服務(wù)如何界定？

<50aa一般做多肽合成，>50aa多肽合成困難，可以嘗試表達(dá)。

4、哪些因素會(huì)影響基因合成和表達(dá)的成本？

基因合成成本主要取決于基因的長(zhǎng)度和復(fù)雜性。表達(dá)（蛋白質(zhì)生產(chǎn)）成本主要受表達(dá)系統(tǒng)、目的蛋白質(zhì)量和純度，以及其他特殊要求如標(biāo)簽去除，內(nèi)毒素水平控制，特殊標(biāo)簽等影響。

5、蛋白表達(dá)過(guò)程中，雜質(zhì)有些什么？

雜質(zhì)大多是細(xì)胞內(nèi)或培養(yǎng)基內(nèi)的物質(zhì)，可以通過(guò)層析技術(shù)去除。

6、蛋白純度最高可以做到多少？蛋白純化后對(duì)應(yīng)純度蛋白應(yīng)用有哪些？

純度可以達(dá)到95%，Biacore和結(jié)晶對(duì)純度要求較高，一般要求高于90%純度，很難根據(jù)純度界定應(yīng)用。

7、能保證客戶需要的蛋白有活性嗎？

影響蛋白活性的因素有很多，所以無(wú)法保證蛋白的活性，但是三羊開(kāi)肽會(huì)通過(guò)蛋白分析給出您在表達(dá)和純化中的建議，盡量獲得活性蛋白。

8、通常蛋白在什么條件下保存比較好？

將蛋白等量分裝，在-80℃或液氮中長(zhǎng)期貯存，并且要避免多次凍融。

1、抗原多肽設(shè)計(jì)應(yīng)滿足什么條件？

為了使生產(chǎn)抗體獲得最佳效果，設(shè)計(jì)應(yīng)滿足一個(gè)基本條件：在免疫過(guò)程中，該抗原既不會(huì)產(chǎn)生過(guò)強(qiáng)的免疫反應(yīng)，同時(shí)又能產(chǎn)生出對(duì)感興趣的蛋白有結(jié)合能力的抗體。

2、抗原多肽的序列長(zhǎng)度是多少才合適？

通常我們會(huì)建議序列長(zhǎng)度在8-20個(gè)氨基酸殘基之間比較適宜，如果太短，就有多肽太特殊、所產(chǎn)生的抗體與天然蛋白之間的親和力（結(jié)合能力）不夠強(qiáng)的風(fēng)險(xiǎn)，同樣，如果序列長(zhǎng)度超過(guò)20，將有可能引入二級(jí)結(jié)構(gòu)，所產(chǎn)生的抗體失去特異性的可能，而且肽鏈越長(zhǎng)，通常合成難度增大，不易獲得高純度的產(chǎn)品。

3、制備抗體，通常是選擇蛋白的N端還是C端？

為了避免識(shí)別區(qū)域隱藏在蛋白內(nèi)部的風(fēng)險(xiǎn)，我們通常建議選擇蛋白的N，C兩端來(lái)產(chǎn)生的相應(yīng)的抗體。因?yàn)樵谕暾牡鞍字?，N，C兩端通常是暴露在蛋白表面的。然而，一定要注意膜蛋白的C端疏水性太強(qiáng)，不適合作為抗原。

4、可以使用肽抗原作為陽(yáng)性對(duì)照在蛋白質(zhì)印跡中測(cè)試抗血清嗎？

肽抗原（未結(jié)合）的分子量 (MW) 太小，無(wú)法用于傳統(tǒng)的蛋白質(zhì)印跡 (WB) 測(cè)試。為了驗(yàn)證 WB 中目標(biāo)條帶的特異性，建議運(yùn)行“抗體阻斷”對(duì)照，使用肽抗原阻斷一抗。推薦的出血稀釋度為 1:1000（等于 1μg/ml），封閉肽約為 2μg/ml。

5、如果只用一個(gè)磷酸殘基制造針對(duì)肽的抗體，當(dāng)它在兩個(gè)位點(diǎn)都被磷酸化時(shí)，它是否仍能識(shí)別該蛋白質(zhì)？

如果蛋白質(zhì)在兩個(gè)位點(diǎn)都被磷酸化時(shí)，單一的磷酸肽抗體可以識(shí)別蛋白質(zhì)。但是，如果蛋白質(zhì)僅在一個(gè)位點(diǎn)被磷酸化時(shí)，雙磷酸肽抗體也可以識(shí)別蛋白質(zhì)。因此，很難開(kāi)發(fā)出一種抗體能夠保證蛋白質(zhì)在兩個(gè)位點(diǎn)都被磷酸化時(shí)才識(shí)別該蛋白質(zhì)，而在只有一個(gè)位點(diǎn)被磷酸化時(shí)不結(jié)合。

6、如何定義優(yōu)質(zhì)抗體？

優(yōu)質(zhì)抗體是一種具有適當(dāng)靈敏度和特異性的抗體，能夠回答您的檢測(cè)所提出的問(wèn)題。但需要注意的是，一種抗體不一定適用于所有應(yīng)用。

7、載體蛋白交聯(lián)的方法是什么？

將載體蛋白加在遠(yuǎn)離抗體識(shí)別區(qū)域的一端，在序列中沒(méi)有Cys的情況下在N或C端加上Cys為交聯(lián)的首選方法。

8、如何確定是要選擇單克隆抗體還是多克隆抗體？

一般來(lái)說(shuō)，單克隆抗體特異性強(qiáng)，但親和力相對(duì)小，檢測(cè)抗原靈敏度相對(duì)就低。而多克隆抗體特異性稍弱，但抗體的親和力強(qiáng)，靈敏度高。與單克隆抗體相比，大量多克隆抗體的生產(chǎn)相對(duì)快速且成本低廉，它們是非特異性的，因?yàn)樗鼈兡軌蜃R(shí)別任何一種抗原上的多個(gè)表位。

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